کیت رنگ آمیزی آلبرت – بهار افشان (آماده مصرف)

مقدمه

رنگ‌آمیزی آلبرت یکی از روش‌های اختصاصی برای شناسایی و مشاهده گرانول‌های متاکروماتیک موجود در برخی باکتری‌ها است. این گرانول‌ها در باکتری‌هایی مثل کورینه‌باکتریوم دیفتریه (عامل بیماری دیفتری) قابل‌مشاهده هستند. رنگ‌آمیزی آلبرت یک روش ساده، سریع و مقرون‌به‌صرفه است که به‌ویژه در تشخیص اولیه دیفتری و افتراق این باکتری از سایر‌ گونه‌های مشابه استفاده می‌شود.

کاربردهای کیت رنگ‌آمیزی آلبرت

این روش در موارد زیر کاربرد دارد:

شناسایی کورینه‌باکتریوم‌ها

به‌ویژه شناسایی گونه‌های پاتولوژیک کورینه‌باکتریوم دیفتریه. مشاهده گرانول‌های متاکروماتیک که به شکل نقاط برجسته و تیره‌رنگ در سیتوپلاسم سلول باکتری ظاهر می‌شوند.

تشخیص بیماری دیفتری

استفاده در موارد مشکوک به عفونت‌های دستگاه تنفسی فوقانی و تأیید جلودستی تشخیص دیفتری.

افتراق گونه‌های پاتوژن و غیرپاتوژن کورینه‌باکتریوم

این رنگ‌آمیزی کمک می‌کند تفاوت میان کورینه‌باکتریوم دیفتریه و گونه‌های غیربیماری‌زا مثل کورینه‌باکتریوم دیفتروئید مشخص شود.

آموزش و تحقیقات میکروبیولوژی

این رنگ‌آمیزی علاوه بر کاربرد بالینی، در آزمایشگاه‌های آموزشی و تحقیقات میکروبیولوژی برای مشاهده ساختار گرانول‌ها و آموزش دانشجویان نیز استفاده می‌شود.

اجزای کیت رنگ‌آمیزی آلبرت

کیت رنگ‌آمیزی آلبرت معمولاً شامل دو محلول اصلی است:

آلبرت رنگ A (Albert Stain A): شامل مالاکیت گرین و گلیسرول؛ این ماده عمدتاً سلول‌های باکتری را رنگ می‌کند.

آلبرت رنگ B (Albert Stain B): شامل ترکیباتی مثل اسید تانیک و کریستال ویولت که باعث رنگ‌آمیزی اختصاصی گرانول‌های متاکروماتیک می‌شوند.

روش انجام رنگ‌آمیزی آلبرت

رنگ‌آمیزی آلبرت به‌طور کلی در مراحل زیر انجام می‌شود:

تهیه گسترش: گسترش نازکی از نمونه موردنظر (معمولاً نمونه تهیه‌شده از ناحیه حلق) روی لام تهیه و در هوا خشک می‌شود.

فیکساسیون: گسترش تهیه‌شده با حرارت فیکس می‌شود (به‌طور ملایم روی شعله عبور داده می‌شود).

رنگ‌آمیزی با آلبرت رنگ A: لام به مدت 3 تا 5 دقیقه با رنگ A پوشانده می‌شود تا تمام بخش‌های سلول باکتری رنگ‌آمیزی شوند.

افزودن آلبرت رنگ B: بدون شستن، مستقیماً رنگ B به لام اضافه می‌شود و اجازه داده می‌شود که به مدت 2 دقیقه باقی بماند.

شستشو: لام با آب شسته، در هوا خشک می‌شود و برای مشاهده میکروسکوپی آماده است.

مشاهده زیر میکروسکوپ نوری: با استفاده از عدسی 100X (Immersion Oil)، سلول‌ها و گرانول‌های متاکروماتیک بررسی می‌شوند. گرانول‌های متاکروماتیک به رنگ آبی تا بنفش و سلول‌های باکتریایی به رنگ سبز مشاهده می‌شوند.

کنترل کیفی (Quality Control) در کیت رنگ‌آمیزی آلبرت

برای اطمینان از عملکرد صحیح کیت و نتایج قابل‌اعتماد، باید نکات زیر در کنترل کیفی رعایت شود:

کنترل مثبت و منفی

کنترل مثبت: استفاده از یک نمونه استاندارد حاوی کورینه‌باکتریوم دیفتریه (Corynebacterium diphtheriae) برای بررسی کارایی کیت.

کنترل منفی: استفاده از باکتری بدون گرانول‌های متاکروماتیک (مانند اشریشیا کلی یا گونه‌های غیرپاتوژنیک کورینه‌باکتریوم) برای اطمینان از عدم ظهور رنگ‌آمیزی کاذب.

تأیید کیفیت رنگ‌ها

بررسی کیفیت و محلولیت رنگ‌ها؛ کریستال ویولت و مالاکیت گرین نباید رسوب کرده باشند.

بررسی تاریخ انقضا و مطمئن شدن از شرایط نگهداری صحیح.

رعایت مراحل دقیق روش کار

مدت‌زمان رنگ‌آمیزی: زمان‌بندی رنگ‌آمیزی باید دقیقاً برابر با توصیه شرکت سازنده باشد.

عدم شستشوی نادرست: محلول رنگ آمیزی درست استفاده شود و به درستی شسته شود تا اشکالی در مشاهده گرانول‌ها ایجاد نشود.

کالیبراسیون میکروسکوپ

اطمینان از وضوح لام زیر میکروسکوپ با عدسی 100X.

تمیز نگه‌داشتن عدسی‌ها و استفاده از روغن ایمرسیون استاندارد.

آموزش کارکنان

افرادی که مسئولیت این آزمایش را دارند باید آموزش‌های کافی و تجربه لازم را داشته باشند؛ محلول‌ها به درستی آماده شوند و اشتباه در رنگ‌آمیزی رخ ندهد.

مزایا و محدودیت‌های رنگ‌آمیزی آلبرت

مزایا

سریع و اقتصادی.

توانایی مشاهده دقیق گرانول‌های متاکروماتیک که تشخیصی برای کورینه‌باکتریوم دیفتریه هستند.

قابل‌انجام در آزمایشگاه‌های با امکانات محدود.

محدودیت‌ها

تشخیص اولیه: این روش فقط یک تشخیص جلودستی ارائه می‌دهد و برای تأیید نهایی نیاز به کشت باکتری یا آزمون‌های مولکولی مثل PCR است.

اشتباهات رنگ‌آمیزی: رعایت نکردن زمان یا دقت در مراحل ممکن است به نتایج مثبت یا منفی کاذب منجر شود.

محدودیت گونه‌ها: این روش برای تمام میکروارگانیسم‌ها کاربرد ندارد و محدود به مشاهده گرانول‌های خاص است.

اشتباهات رایج در روش آلبرت

استفاده از نمونه غیرمناسب و احتمال آلودگی متقاطع.

شستشو یا رنگ‌آمیزی بیش‌ازحد که باعث از بین رفتن گرانول‌ها یا کاهش کیفیت تشخیص می‌شود.

استفاده از رنگ‌های بی‌کیفیت یا تاریخ مصرف گذشته.